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第四节抗体效价与同种自身抗体的检测（第1页）

第四节抗体效价与同种自身抗体的检测

一、抗体效价滴定

（一）原理

血清经连续倍比稀释后与选定的红细胞进行反应，通常以肉眼可见的明显凝集的最高血清稀释度数值的倒数来表示效价。这个半定量的方法能提供血清中抗体的量或红细胞上抗原量的情况，常用于产前检查和抗体特异性鉴定。当使用不稀释的血清时，某些抗体能引起普遍的凝集，比较效价滴定结果，就可以显示其特异性。

（二）材料

（1）移液管。

（2）滴定的血清。

（3）2%～5%的表达某些抗原的红细胞悬液，红细胞悬液的一致对确保结果的致非常重要。

（三）方法

（1）按照血清稀释度标记一组试管（如1：1，1：2，1：4），1：1是一个体积的未稀释血清，1：2是一个体积的血清加一个体积的稀释液或者说稀释液中血清的体积所占比例为50%。

（2）除第1管（1：1）、其他试管都加1份盐水。

（3）在第1，2个试管中各加1份血清。

（4）第2管混匀后移出1份容量至后1管（1：4）。

（5）用相同方法继续稀释，从最后一个试管中取出1份容量保留备用。

（6）标记10个12*75试管。

（7）对每一个稀释度的血清用1支滴管滴2滴在标记的试管中，各加一滴红细胞悬液。

（8）混匀，并用适当的技术来检查。

（9）肉眼观察试验结果。

前带现象可以引起第1管的反应比稀释度更高的反应弱一些，看结果最好从最大稀释度的血清开始。

（四）解释

1．肉眼观察凝集为1+的最高稀释度，出现凝集的最高稀释度的倒数是试验的结果。如果最高稀释的血清仍有凝集，则未达到终点，需继续稀释和试验。

2．在比较研究中，效价至少有3个以上不同稀释度差异才能算有意义。技术上的不同或固有的变异性可能使两次实验产生的结果有一个稀释度的差异。

3．不考虑凝集强度，仅考虑效价能使人误解，根据对每个样本在不同稀释度中观察的凝集反应强度，指定一个数字来表示滴定结果之间的差异，把这些数字加起来就是效价评分，是抗体反应性强度的半定量估计（表12～4），总评分相差10或以上就认为反应性的差别有意义。

（五）注意事项

（1）注吸管是最基本的，建议每个稀释度更换吸管。

（2）孵育的最佳时间及温度和离心时间、离心力必须一致。

（3）试剂细胞的表型、浓度、生产日期将会影响结果。

（4）效价和评分有时也用来评价抗原的抗原性强弱和不实验方法的差异。

二、用巯基试剂区分IgM抗体和IgG抗体

（一）原理

有些血型抗体（如抗A）在一个体中可有两种形式，有IgG也有IgM。IgM分子由5个轴射状排列的亚单位组成，亚基间以二硫键相连，亚基间的二硫键比亚基内链间与链内二硫键容易被巯基试剂破坏，经巯基试剂处理后，IgM失去原来的血清学性质。常用的巯基试剂有二硫苏糖醇和2-巯基乙醇。

（二）试剂