第十六章常用血清学检查技术
第一节血液标本
一、血样的采集与保存
1红细胞标本可用针刺耳垂或指尖采血,直接用生理盐水配成红细胞悬液。也可取静脉血,用ACD或CPD血液保存液或乙二胺四乙酸二钠抗凝。每毫升血用5%的(A)。血液与保存液之比为4:1。置于4℃可保存3周。一般试验用的凝血标本要在5天内使用,以不溶血为准。用盐水配制的红细胞悬液只能在当天使用。在室温较高的环境中,使用间歇要将血样在4℃冷藏防止抗原减弱。
2血清标本取静脉血沿试管壁慢慢注入干燥试管,置于37℃,凝固后用下班棒搅动血块,使多与试管壁分开,置4℃过夜。离心分离血清,用吸管将血清吸入另一干燥试管,加入10%叠氮钠溶液防腐,使叠氮钠的最终浓度为0。1%。不稀释的密封血清标本如有防腐剂可在4℃保存数月,在-20℃以下可保存数年,抗体活性基本不变。用生理盐水稀释的血清只限当天用。交叉配血试验用的血清用于再次配血时不超过72小时。
二、红细胞悬液的制备
用于血型鉴定、配血等的红细胞,使用前应用盐水洗涤1~3次,去除附着在红细胞表面的血型物质,血浆蛋白等分。抗球蛋白试验中被抗体致敏的红细胞至少洗3次。倾除上清液后用干净纱布把试管口的盐水吸尽。压积红细胞加入一定量的生理盐水,配制成红细胞悬液。在实际工作中,通常取压积红细胞1滴,加2ml盐水,称为2%的细胞悬液,加0。8ml盐水为5%,加0。4ml盐水为10%,加0。2ml为20%的细胞悬液。鉴定红细胞血型(滴定效价)和间接抗球蛋白试验一般用2%~5%的细胞悬液,测定抗体亲和力用10%的细胞悬液。
二、血清倍量稀释
取小试管若干只,依次编号。每管加盐水0。1(或0。2)ml。准确吸取0。1(或0。2)ml血清加入第一管,充分混匀,即为1:2血清稀释液。然后从第一号管吸出0。1(或0。2)ml,加入第2管,充分混匀后再吸0。1(或0。2)ml加入第3管,依次稀释到第n管,稀释度为1:2n。